用于无细胞原型构建的线性DNA模板的模块化Golden Gate组装
生物大分子
2023-10-23 v1
摘要
无细胞转录翻译(TXTL)系统已成为测试基因调控元件与线路的有力工具。无细胞原型构建可大幅加速合成生物学中新功能的设计-构建-测试循环,尤其是在使用线性DNA模板时。本文描述了一种Golden Gate辅助的工作流程,通过从模块化克隆工具箱的基本遗传部件组装转录单元,快速生产用于TXTL反应的线性DNA模板。由启动子、核糖体结合位点(RBS)、编码序列和终止子等多个部件组成的功能性DNA模板,在体外通过一锅法Golden Gate组装反应制备,随后进行PCR扩增。通过消除细胞内耗时的转化与克隆步骤,并利用模块化克隆工具箱,我们的无细胞原型构建工作流程可在一天内为大量新构建体产出数据。
引用
@article{arxiv.2310.13665,
title = {Modular Golden Gate Assembly of Linear DNA Templates for Cell-free Prototyping},
author = {François-Xavier Lehr and Aukse Gaizauskaite and Katarzyna Elżbieta Lipińska and Sara Gilles and Arpita Sahoo and René Inckemann and Henrike Niederholtmeyer},
journal= {arXiv preprint arXiv:2310.13665},
year = {2023}
}
备注
21 pages, 5 figures, protocol