简化重组蛋白生产：将 Golden Gate 克隆与标准化蛋白纯化方案相结合
生物大分子
2023-10-11 v1
摘要
重组蛋白生产在分子生物学中至关重要，通过对纯化样品进行生物物理、生化和结构分析，能够深入揭示细胞过程。对大量生物分子的需求常带来挑战，尤其对于真核蛋白。大肠杆菌表达系统已发展以应对这些问题，提供了如可溶性标签、翻译后修饰能力和模块化质粒库等先进特性。然而，现有工具往往复杂，限制了其可及性，并需要能在标准化条件下快速筛选的精简系统。基于 Golden Gate 克隆方法，我们开发了一种简单的“一锅法”策略，使用精心选择的标签（如六组氨酸、SUMO、MBP、GST 和 GB1）生成表达构建体，以增强溶解度和表达。标签可通过 TEV 蛋白酶切割去除，该系统借助 mScarlet 荧光实现可视化克隆验证。我们提供了一套涵盖寡核苷酸设计、克隆、表达、Ni-NTA 亲和色谱和尺寸排阻色谱的完整方案。因此，该方法精简了原核与真核蛋白生产，使具备基础蛋白生化设备的标准分子生物学实验室也能开展。
引用
@article{arxiv.2310.06456,
title = {Simplifying recombinant protein production: Combining Golden Gate cloning with a standardized protein purification scheme},
author = {Sonja Zweng and Gabriel Mendoza-Rojas and Florian Altegoer},
journal= {arXiv preprint arXiv:2310.06456},
year = {2023}
}
备注
16 pages, 3 figures