利用 Golden Gate 质粒套装实现无痕且兼容 MoClo 的转录单元组装

Golden Gate 克隆已成为一种强大且广泛使用的 DNA 组装方法。其模块化特性和标准化部件的可重用性允许快速构建转录单元和多基因构建体。重要的是，其模块化结构使其与实验室自动化兼容，从而能够进行系统且高度复杂的 DNA 组装。Golden Gate 克隆依赖于 IIS 型酶，这些酶在距其定向识别基序固定距离处切割相邻的未定义序列基序。这一特性已被用于定义具有特定突出端（“融合位点”）的分层 Golden Gate 组装标准，以用于特定的部件文库。最简单的 Golden Gate 标准将由三个部件文库组成，即启动子、编码序列和终止子序列。每个文库都将具有定义的融合位点，允许通过分层 Golden Gate 组装生成转录单元。通常，使用产生四个核苷酸突出端的 IIS 型酶。这会在分层 DNA 组装中产生小的疤痕序列，可能影响转录单元的功能。然而，存在产生三个核苷酸突出端的酶，例如 SapI。本文提供了一个分步方案，说明如何使用 SapI 并利用起始密码子和终止密码子进行无痕转录单元组装。该方案还指导如何使用模块化克隆标准，将所得转录单元进行多基因 Golden Gate 组装。表达荧光蛋白的转录单元被用作示例。