用于体外高效人工基因组装和酵母酿酒酵母中表达的Gateway载体
分子网络
2013-05-14 v3
摘要
构建合成基因网络需要按特定顺序组装编码功能性生物部分的DNA片段。然而这可能是一个耗时的过程。为了解决这个技术瓶颈，我们创建了一系列Gateway穿梭载体和一个整合载体，它们促进了人工基因的组装及其在芽殖酵母酿酒酵母中的表达。我们的方法能够通过体外一步重组反应，从启动子和开放阅读框(ORF)盒快速构建人工基因。此外，这样创建的质粒可以容易地引入酵母细胞中以测试组装基因的功能。作为合成基因网络的灵活调控组件，我们还通过将四环素调控的反式激活因子tTA和rtTA与生长素诱导降解子(AID)融合，创建了它们的新版本。利用我们的基因组装方法，我们制备了这些工程化反式激活因子AIDtTA和AIDrtTA的酵母表达载体，然后在酵母中测试了它们的功能。我们证明这些因子可以被多西环素调控，并在向培养基中添加生长素后迅速降解。总之，这里描述的用于组合基因组装的方法是多功能的，并且将成为酵母合成生物学的一个有价值的工具。
引用
@article{arxiv.1212.5109,
title = {Gateway vectors for efficient artificial gene assembly in vitro and expression in yeast Saccharomyces cerevisiae},
author = {Claudiu V. Giuraniuc and Murray MacPherson and Yasushi Saka},
journal= {arXiv preprint arXiv:1212.5109},
year = {2013}
}