结合寡核苷酸池和Golden Gate克隆构建蛋白质变体文库或用于CRISPR应用的引导RNA文库
定量方法
2024-01-23 v1 生物大分子
摘要
寡核苷酸池是阵列合成的、用户定义的单链寡核苷酸混合物，可用作文库克隆的合成DNA来源。虽然目前提供最经济的合成DNA来源，但寡核苷酸池也存在局限性，例如最大合成长度（约350个碱基）、与替代合成方法相比更高的错误率，以及由于合成不完全而导致的截短分子。在此，我们为用户提供了一份全面的方案，详细说明了如何将寡核苷酸池与Golden Gate克隆结合使用，以创建用户定义的蛋白质突变体文库，以及用于CRISPR应用的单引导RNA文库。我们的方法经过优化，可在酵母工具包Golden Gate方案中工作，但原则上与任何其他基于Golden Gate的模块化克隆工具包兼容，并可扩展到Golden Gate之外的其他基于限制性内切酶的克隆方法。我们的方法可产生高质量、经济实惠的内部变体文库。
引用
@article{arxiv.2401.11746,
title = {Combining oligo pools and Golden Gate cloning to create protein variant libraries or guide RNA libraries for CRISPR applications},
author = {Alicia Maciá Valero and Rianne C. Prins and Thijs de Vroet and Sonja Billerbeck},
journal= {arXiv preprint arXiv:2401.11746},
year = {2024}
}