合成生物学中 DNA 无限制重叠序列克隆技术综述
生物大分子
2025-05-07 v1
摘要
DNA 克隆方法是分子生物学、合成生物学和基因工程中的基础工具，能够为各种科学和生物技术应用实现精确的 DNA 操作。本综述系统地总结了当前合成生物学中主要使用的无限制重叠序列克隆（RFOSC）技术，并考察了它们的发展、效率、实用性和具体应用。本文讨论了体外方法，包括 Gibson 组装、环状聚合酶延伸克隆（CPEC）、聚合酶不完全引物延伸（PIPE）、重叠延伸克隆（OEC）、瓣状核酸内切酶克隆（FEN-Cloning）以及商业化的技术如 TOPO 和 In-Fusion，同时也讨论了混合方法，如不依赖连接的克隆（LIC）、不依赖序列的克隆（SLIC）和 T5 核酸外切酶依赖性组装（TEDA）。此外，本文还批判性地评估了利用宿主重组机制的体内方法，包括酵母同源重组（YHR）、体内组装（IVA）、转化相关重组（TAR）以及创新方法，如多轮体内位点特异性组装（MISSA）和噬菌体酶辅助直接组装（PEDA）。本综述强调，方法选择应考虑单个研究项目的规模、复杂性、成本和具体需求，并指出没有一种单一技术是普遍最优的。未来趋势表明，酶效率、宿主通用性和自动化的整合将日益增强，从而拓宽 DNA 组装技术的可及性和能力。
引用
@article{arxiv.2505.03681,
title = {A review of DNA restriction-free overlapping sequence cloning techniques for synthetic biology},
author = {Isabella Frighetto Bomfiglio and Isabelli Seiler de Medeiros Mendes and Diego Bonatto},
journal= {arXiv preprint arXiv:2505.03681},
year = {2025}
}
备注
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