活体完整拟南芥根中核凝聚体内开花调控蛋白的单分子定量
生物大分子
2023-01-25 v1 生物物理
摘要
本文描述了两种互补荧光成像技术的耦合标准化，并将其应用于由开花调控位点A（FCA）的EGFP荧光报告蛋白形成的液-液相分离凝聚体，该蛋白在植物开花过程的表观遗传调控中与染色体DNA相关联。首先，我们使用自建的单分子Slimfield显微镜建立荧光蛋白标准。该样品由表达Mig1蛋白的活酵母细胞组成，Mig1是一种在高葡萄糖条件下定位于细胞核的代谢调节因子，其融合了与FCA融合构建体相同类型的EGFP标签。然后我们采用商用共聚焦AiryScan显微镜研究同一标准。最后，我们展示了如何在快速时间尺度上对完整根尖中的FCA-EGFP核凝聚体进行定量，并应用此校准。该方法是一种有价值的方法，可在缺乏事实上的单分子检测灵敏度的共聚焦仪器上，获得整合于植物染色体架构中的蛋白质凝聚体的单分子精确化学计量与拷贝数估计。
引用
@article{arxiv.2108.13743,
title = {Single-molecular quantification of flowering control proteins within nuclear condensates in live whole Arabidopsis root},
author = {Alex L. Payne-Dwyer and Mark C. Leake},
journal= {arXiv preprint arXiv:2108.13743},
year = {2023}
}