多共焦荧光相关光谱学：实验演示及其在活细胞测量中的潜在应用
生物物理
2011-12-23 v1
摘要
我们首次报道了一种多共焦荧光相关光谱学（mFCS）技术，该技术通过结合空间光调制器（SLM）和电子倍增CCD相机（EM-CCD），允许在不同位置进行并行测量。SLM用于产生一系列激光光斑，而EM-CCD的像素则充当虚拟针孔。通过使用球面波近似计算加载到SLM上的相位图，可以产生多个衍射极限激光光斑，这些光斑可以对齐排列或散布在视场上。为了达到足够快的成像速率，相机以不同的采集模式使用，其中最快的模式可实现100 μs的时间分辨率。我们使用甘油中的磺基罗丹明G溶液对实验装置进行了验证，并证明观测体积与标准共焦装置相似。为了证明我们的mFCS方法适用于细胞内研究，我们在两种稳定细胞系上进行了实验：表达eGFP-肌动蛋白的小鼠胚胎成纤维细胞和表达热休克因子融合蛋白HSF1-eGFP的H1299细胞。在第一种情况下，通过分析自相关曲线，我们能够恢复细胞质中G-肌动蛋白的扩散常数，尽管我们也对与F-肌动蛋白的复杂相互作用网络敏感。关于HSF1，我们能够清晰地观察到热休克期间分子数量和HSF1动力学的变化。
引用
@article{arxiv.1112.5392,
title = {Multi-confocal Fluorescence Correlation Spectroscopy : experimental demonstration and potential applications for living cell measurements},
author = {Rémi Galland and Jie Gao and Meike Kloster and Gaetan Herbomel and Olivier Destaing and Martial Balland and Catherine Souchier and Yves Usson and Jacques Derouard and Irène Wang and Antoine Delon},
journal= {arXiv preprint arXiv:1112.5392},
year = {2011}
}