结合荧光相关光谱与光漂白测量溶液中多荧光团标记
化学物理
2010-03-01 v2 生物物理
光学
摘要
确定与给定分子(DNA、蛋白质等)偶联的荧光实体数量是众多生物学研究的关键点，尤其是基于单分子方法的研究。在此背景下，可靠的方法不仅对于表征标记过程至关重要，而且对于量化相互作用(例如分子复合物内的相互作用)也很重要。我们结合荧光相关光谱(FCS)和光漂白实验，测量了cDNA(含有少量百分比用Alexa Fluor 647标记的C碱基)溶液中的有效分子数和分子亮度随总荧光计数率的变化。这里，光漂白被用作控制参数来改变实验输出(亮度和分子数)。假设每个cDNA上荧光标记的数量服从泊松分布，FCS-光漂白数据可以很容易地拟合，以得出每条cDNA链上荧光标记的平均数量(@2)。由于荧光标记数量的统计分布以及它们掺入cDNA后未知的亮度，仅凭cDNA的亮度无法确定该数量。通过分析光子计数分布(使用累积量方法)，证实了标记cDNA的荧光团数量的统计分布，该方法清楚地表明cDNA链的亮度因分子而异。
引用
@article{arxiv.0909.0878,
title = {Measuring, in solution, multiple-fluorophore labeling by combining Fluorescence Correlation Spectroscopy and photobleaching},
author = {Antoine Delon and Irène Wang and Emeline Lambert and Silva Lerbs-Mache and Régis Mache and Jacques Derouard and Vincent Motto-Ros and Rémi Galland},
journal= {arXiv preprint arXiv:0909.0878},
year = {2010}
}
备注
38 pages (avec les figures)