存在淬灭剂时荧光关联光谱法的稳健性

受近期对 FCS（荧光关联光谱，Fluorescence Correlation Spectroscopy）技术存疑的出版物启发，我们仔细审视了不可逆（静态）与可逆（动态）淬灭如何影响此类数据的解读。我们考虑了一些中间情形，其中当染料标记物体以相对快速的时间尺度扩散时，光物理（静态淬灭、闪烁状三重态弛豫）对自相关曲线的影响可能很微妙，并以色氨酸作为淬灭剂。作为快速扩散的小分子染料的例子，我们将淬灭剂与 Alexa 488 染料混合，淬灭反映为数据变得异常嘈杂。这反映了当平移扩散、淬灭和闪烁过程的时间尺度重叠时，被淬灭与未被淬灭染料的双分散群体。作为大分子染料标记物体的例子，我们将淬灭剂与染料标记牛血清白蛋白混合。此时扩散、静态淬灭和闪烁时间尺度相互分离，推断出的平移扩散现在对淬灭剂依赖较弱。我们得出结论：当扩散分子的扩散速度明显慢于其所附荧光染料光物理过程的时间尺度时，淬灭的影响不言自明，且若分析中选用正确的拟合函数，FCS 自相关曲线会给出恰当的扩散系数。