数字PCR为高通量测序提供灵敏且绝对的校准
定量方法
2008-08-19 v1 基因组学
摘要
几种下一代测序仪在样品制备过程中受到限制，需要对文库中待测序的模板分子数量进行绝对测量。按照目前的实践，这一要求的实际影响会损害测序性能，既需要大量的样品DNA，又需要执行额外的测序运行。我们使用数字PCR对测序文库进行定量，并通过在454和Solexa测序平台上从亚纳克量的细菌和人类DNA制备和测序文库，证明了其灵敏度和鲁棒性。该测定方法允许绝对定量，并消除了与标准曲线的构建和应用相关的不确定性。数字PCR平台消耗亚飞克量的测序文库，并给出高度准确的结果，从而允许在设置测序运行时使用最佳DNA浓度，而无需昂贵且耗时的滴定技术。这种方法还将输入样品需求降低了1000倍以上：从微克级DNA降至不到一纳克。
引用
@article{arxiv.0808.2232,
title = {Digital PCR provides sensitive and absolute calibration for high throughput sequencing},
author = {Richard A. White and Paul Blainey and H. Christina Fan and Stephen R. Quake},
journal= {arXiv preprint arXiv:0808.2232},
year = {2008}
}