用于生物 TIRF 显微镜的倏逝波穿透深度校准
生物物理
2019-10-02 v1 定量方法
摘要
大约一半的细胞内蛋白质位于质膜处或附近。在这一受限空间内，细胞感知环境、与邻近细胞通讯，并通过胞吐和胞吞机制交换物质。配体与受体结合，离子跨通道孔流动， transmitter 和代谢物逆浓度梯度转运。受体、离子通道、泵和转运蛋白是这些生物过程的分子基础，也是药物发现的重要靶标。全内反射荧光显微镜抑制了细胞深层的背景，为选择性成像活细胞基底膜附近的动态过程提供了对比度。全内反射荧光的光学切片基于玻璃-细胞界面处产生的倏逝波激发限制。激发光实际穿透样品的深度难以获知，使得全内反射荧光数据的定量解释存在问题。然而，许多应用如超分辨显微镜、共定位、光漂白后荧光恢复、近膜光漂白后荧光恢复、解笼锁或光激活-切换，以及单粒子追踪都需要对倏逝波激发图像进行定量解释。在此，我们回顾了表征倏逝波的现有技术，并提供了跨图像、跨实验和跨实验室比较全内反射荧光数据的路线图。
引用
@article{arxiv.1901.01281,
title = {Calibrating evanescent-wave penetration depths for biological TIRF microscopy},
author = {Martin Oheim and Adi Salomon and Adam Weissman and Maia Brunstein and Ute Becherer},
journal= {arXiv preprint arXiv:1901.01281},
year = {2019}
}
备注
18 text pages, 7 figures and one supplemental figure