全AAV衬基的选择性富集

使用重组性腺相关病毒(rAAV)的基因疗法已开发出用于治疗单基因疾病和获得性疾病，但由于制造成本高昂，目前是最昂贵的药物之一。产生rAAV的细胞会生成大量空衬基(50-90%)和部分填充衬基,在最终制剂前必须予以去除。常规分离工艺在去除空衬基和部分填充衬基方面效率低、产率低、规模扩展差、耗时且需额外的纯化步骤。本文演示了一种从由全衬基、部分填充衬基、空衬基及其他蛋白杂质混合物中实现全衬基选择性结晶分离的单步工艺,这是一种首次应用于蛋白纯化的选择性结晶工艺,且首次在选择性结晶历史上无需对目标组分进行物理或化学改性即可实现,该工艺高度高效、可扩展且经济。采用挂降式蒸发浴实验筛选出全衬基和空衬基结晶条件,进而定义晶核生长于全衬基、空衬基或两者兼容的条件。以rAAV衬基型5、8、9为典型载体及其规模放大结果表明,可在混合物中实现全衬基的选择性结晶与分离,其全衬基富集率可达80%以上,约高出20%,产率可达90%以上,约高出30%,并保持生物活性,在短时间内完成(小于4小时),约减少87%的加工时间,无需额外纯化步骤即可在一轮内实现。