脂质异质性和相行为对单分子水平磷脂酶A2作用的影响
生物物理
2010-06-17 v1
摘要
我们通过将Langmuir槽安装在具有单分子灵敏度的宽场荧光显微镜上，监测了磷脂酶A2（PLA2）对L-和D-二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）Langmuir单分子层的作用。这使得能够直接观察活性水解过程中单个PLA2分子在异质脂质环境中的活性和扩散行为。实验表明，酶分子几乎只吸附并与DPPC单分子层的流体区域相互作用。凝胶态L-DPPC的域仅从凝胶-流体界面处被降解，在那里带负电荷的水解产物（脂肪酸盐）的积累导致PLA2迁移率的变化。通过单粒子追踪（SPT）表征了单个酶在单分子层上的迁移率。吸附到流体界面的酶的扩散系数在L-DPPC单分子层上为3 μm²/s，在D-DPPC单分子层上为4.6 μm²/s。在富含水解产物的区域，扩散系数降至约0.2 μm²/s。此外，在发生水解的L-DPPC凝胶域边界处观察到较慢的正常和反常扩散模式。酶在单分子层流体区域和产物域上的平均停留时间在约30至220 ms之间。在凝胶域上，停留时间低于实验时间分辨率，即酶只是从凝胶域反射回溶液中。
引用
@article{arxiv.0907.5342,
title = {Influence of Lipid Heterogeneity and Phase Behavior on Phospholipase A2 Action at the Single Molecule Level},
author = {M. Gudmand and S. Rocha and N. S. Hatzakis and K. Peneva and K. Muellen and D. Stamou and H. Uji-I and J. Hofkens and T. Bjornholm and T. Heimburg},
journal= {arXiv preprint arXiv:0907.5342},
year = {2010}
}
备注
10 pages, 10 figures