一种兼容去污剂与还原剂的单步蛋白质测定：cydex blue 测定法
基因组学
2016-10-25 v1 生物大分子
摘要
蛋白质浓度的测定通常是进行生化与蛋白质组学分析样品制备的绝对前提。然而，当前蛋白质测定方法无法同时兼容还原剂与去污剂，而这两类物质在蛋白质组学和电泳中使用的多数变性提取缓冲液中同时存在，尤其在 SDS 电泳中更为突出。我们发现，在考马斯亮蓝基础测定法中加入环糊精可使其兼容去污剂，因为环糊精以 1:1 的分子比例与去污剂形成复合物。由于此类测定法本身对还原剂具有抗性，因此我们开发了一种同时兼容去污剂与还原剂的单步测定法。根据样品缓冲液中去污剂的类型与浓度，可使用 β-环糊精或 α-环糊精，前者能络合更广泛种类的去污剂，后者因在水中的溶解度更高而能络合更大数量的去污剂。环糊精在测定混合物中的终浓度为 2–10 mg/mL。该方法通常可在单步简单分光光度测定中，测定含有低至 0.1 mg/mL 蛋白质、且存在高达 2% 去污剂及 5% 巯基乙醇或 50 mM DTT 等还原剂的样品。本文受版权保护，保留所有权利。
引用
@article{arxiv.1610.07373,
title = {A single step protein assay that is both detergent and reducer compatible: The cydex blue assay},
author = {Thierry Rabilloud},
journal= {arXiv preprint arXiv:1610.07373},
year = {2016}
}