氨性银染提供更好的质谱兼容性

蛋白质酶解肽段质谱分析中的序列覆盖度是低量蛋白详细表征或鉴定的关键问题。在以凝胶为基础的蛋白质组学研究中，序列覆盖度很大程度上取决于蛋白质检测方法。本文显示，氨性银检测方法相较标准硝酸银方法提供了改进的序列覆盖度，同时保持了银染的高灵敏度。随着基于 2D-PAGE 的蛋白质组学的发展，对用于 2-D 凝胶蛋白检测的方法提出了另一重负担。除线性、灵敏度及蛋白间均一性的经典要求外，检测方法现须考虑另一方面，即与 MS 的兼容性。该兼容性由两个不同的互补方面体现：（i）在凝胶中检测并酶解的蛋白质经蛋白酶酶解所得肽段上无加合物与人为修饰，及（ii）酶解后回收并经质谱仪分析的肽段定量产率。此定量产率本身并不十分重要，但作为强烈影响质谱 S/N 从而决定给定蛋白投入量下可检测肽段数（尤其低蛋白量时）的关键参数。这进而影响序列覆盖度及质谱所提供的分析细节。